不同浓度医用亚博体育app官方下载地址对大鼠骨骼肌、滑膜及软骨的影响
来源:西安戴美医疗科技有限公司 | 作者:本站 | 发布时间:2011-10-17 | 浏览:1809次 【关闭此页
不同浓度医用亚博体育app官方下载地址对大鼠骨骼肌、滑膜及软骨的影响
余斌  林庆荣  朱权
南方医科大学南方医院创伤骨,广东省广州市510515
 
摘要 目的 观察关节内注射不同浓度医用亚博体育app官方下载地址对大鼠骨骼肌、滑膜及软骨的影响。方法 30只Wistar大鼠随机均分为5组,对照组注射医用纯氧,其它4组均在大鼠臀大肌、关节腔内穿刺并分别注射10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、80μg/ml的医用亚博体育app官方下载地址,每次1ml,1次/周,共3次。在不同时间点取活检行光镜下病理检查,观察5组大鼠骨骼肌注射亚博体育app官方下载地址10min、30min、3周后活检部位病理改变以及2天、2周、4周时软骨、滑膜细胞的变化。结果 纯氧和低浓度(10μg/ml)亚博体育app官方下载地址对骨骼肌细胞无明显影响,高浓度(30、50、80μg/ml)亚博体育app官方下载地址对会造成肌细胞变性甚至轻度萎缩。亚博体育app官方下载地址10μg/ml组光镜下软骨、滑膜细胞未见明显异常;30μg/ml组显微镜下软骨细胞无肿胀,少量软骨、滑膜细胞增生;50μg/ml组显微镜下软骨、滑膜细胞稍肿胀;80μg/ml组软骨表面粗糙,有浆细胞浸润。结论 浓度为30-80μg/ml的亚博体育app官方下载地址肌肉注射后会产生轻度损伤,浓度为10μg/ml的亚博体育app官方下载地址对骨骼肌没有明显损害作用;50μg/ml以上时,对软骨、滑膜细胞产生损伤, 80μg/ml浓度的医用亚博体育app官方下载地址出现组织结构破坏,30μg/ml以下的亚博体育app官方下载地址关节内注射是安全的。
关键字:亚博体育app官方下载地址 骨骼肌 软骨 滑膜细胞 骨性关节炎
 
骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)是关节炎中最常见的一种疾病, 老年人多见。以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征。关节疼痛和功能障碍,严重影响患者的生活质量。常用保守治疗或关节置换,前者虽然可以改善症状,但存在一定的副作用,后者虽能治愈,但是价格昂贵而且手术有风险,远期效果也不确定。因此,新型疗法的目标应包括高效、安全、简便、经济。亚博体育app官方下载地址具有良好的镇痛作用,可以灭活或抑制蛋白水解酶和炎性细胞因子,减轻炎症;同时,亚博体育app官方下载地址可以诱导产生抗氧化酶,使间质细胞和关节软骨合成增多,并抑制缓激肽的释放及炎性介质PGs的合成,从而减轻疼痛;亚博体育app官方下载地址还可以促进免疫抑制因子的释放,抑制免疫性反应。亚博体育app官方下载地址的这些作用与骨关节炎发病机制密切相关,因此,作者不由得提出这样一个假设:是否可以利用亚博体育app官方下载地址来治疗骨关节炎?本实验对此问题进行初步的探讨,了解不同浓度医用亚博体育app官方下载地址对大鼠骨骼肌、滑膜及软骨的影响。
 
材料与方法
实验动物
Wistar大鼠30只,体重160~220 g,复合饲料喂养(由南方医科大学实验动物中心提供)随机均分为5组,对照组注射医用纯氧,其它4组在大鼠臀大肌、关节腔内穿刺都分别注射亚博体育app官方下载地址10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、80μg/ml,每次1ml,1次/周,共3次。
实验仪器
德国yabo亚博体育公司生产的亚博体育app官方下载地址发生器(Humazon® Promedic®); Olympus光学显微镜;组织切片分析系统;550 nm分光光度计。
方法
30只Wistar大鼠随机均分为5组,对照组注射医用纯氧,其它4组在大鼠臀大肌、关节腔内穿刺都分别注射亚博体育app官方下载地址10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml、80μg/ml,每次1ml,1次/周,共3次。在不同时间点取活检光镜下病理检查。然后分别观察5组大鼠骨骼肌注射亚博体育app官方下载地址10min、30min、3周后活检部位病理改变(HE×100)以及2天、2周、4周时软骨、滑膜细胞的变化。具体标本取材方法:将大鼠麻醉固定于手术台上,切开皮肤及皮下组织,暴露关节囊,注意不要打开关节囊。从髌骨上囊部位注射入关节腔200 ul无菌的PBS,反复活动关节后,仔细抽取灌洗液,必要时切小切口吸取,灌洗液置-20 ℃保存备用。切取大鼠的实验侧股骨内髁、胫骨平台关节软骨,修成0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小组织块,软骨标本用4%多聚甲醛固定,15%乙二胺四乙酸(EDA)脱钙2周,石蜡包埋,HE染色,观察软骨形态学的变化。
统计学处理
    用SPSS10.0软件进行统计学处理,各组实验动物所有参数均数±标准差表示,组间采用方差分析,显著性t检验。
 
结果
注射亚博体育app官方下载地址10min后(图1),对照组与亚博体育app官方下载地址10μg/ml组的肌细胞无明显肿胀,细胞膜光滑完整,肌间隔有少量红细胞,无炎症细胞浸润。亚博体育app官方下载地址30、50、80μg/ml组的肌细胞轻度肿胀,边界稍模糊,肌间隙有少量红细胞,无明显炎症细胞浸润。注射亚博体育app官方下载地址30min后(图2),对照组与亚博体育app官方下载地址10μg/ml组的肌细胞无明显肿胀,细胞膜光滑完整,肌间隔有少量红细胞,无炎症细胞浸润。 亚博体育app官方下载地址30、50、80μg/ml组的肌细胞部分出现变性,未见明显坏死;伴有肌细胞间隙和血管内炎症细胞浸润。注射亚博体育app官方下载地址3周后(图3),对照组与亚博体育app官方下载地址10μg/ml组的肌细胞大小正常,无变性坏死细胞膜光滑完整,无细胞浸润。 亚博体育app官方下载地址30、50、80μg/ml组的肌细胞轻度萎缩,部分伴有玻璃样变,有纤维组织增生。亚博体育app官方下载地址10μg/ml组,2天、2周、4周时软骨、滑膜细胞未见明显异常。亚博体育app官方下载地址30μg/ml组(图4 a,b,c),2天时软骨、滑膜细胞未见异常,2周后软骨表面较规则,滑膜组织内少量、散在的浆细胞浸润,4周后软骨细胞无肿胀,少量软骨、滑膜细胞增生。亚博体育app官方下载地址50μg/ml组(图5 a,b,c),2天后见软骨、滑膜细胞稍肿胀,2周后见软骨细胞增生,滑膜组织内浆细胞浸润,散在的炎细胞,4周后见软骨表面粗糙,滑膜细胞增生,有浆细胞浸润,少量纤维组织增生。亚博体育app官方下载地址80μg/ml组(图6 a,b,c),2天后见滑软骨细胞稍肿胀,滑膜细胞肿胀较明显,2周后软骨、滑膜细胞增生,纤维组织增生,部分见软骨细胞剥脱,4周后软骨表面粗糙,软骨细胞增生,滑膜组织内有纤维增生,浆细胞浸润。
 
讨论
        骨性关节炎(osteoarthritis OA)是一种慢性、系统性疾病,好发于负重较大的膝关节、髋关节、脊柱等部位。OA以关节软骨的退行性变和继发性骨质增生为特点。目前国内外关于OA治疗主要集中在运动治疗、物理治疗、药物治疗等对症治疗,但效果不理想,对肌力、运动、关节稳定性及日常活动能力等均会产生较大影响。如何阻断OA恶性循环是许多研究者一直探讨的问题。目前已经有研究表明亚博体育app官方下载地址有较好的止痛效果,改善膝关节的ROM,总体上改善膝关节功能。相对理疗在减轻疼痛与改善膝关节整体功能效果较好。亚博体育app官方下载地址治疗是一种安全有效的治疗方法。本实验采用不用亚博体育app官方下载地址浓度注射关节,探讨治疗浓度对骨骼肌、滑膜及软骨的影响,以便得到更加科学和规范的浓度标准。
本实验研究显示:10 μg/ml医用亚博体育app官方下载地址组对骨骼肌细胞、软骨和滑膜细胞无明显影响,较纯氧组无明显差异。亚博体育app官方下载地址30μg/ml组的骨骼肌细胞有轻度萎缩,对软骨细胞无明显影响,只有少量软骨、滑膜细胞增生。50μg/ml亚博体育app官方下载地址对骨骼肌有轻度影响。开始时,软骨、滑膜细胞稍肿胀。随后,软骨细胞增生,滑膜组织内浆细胞浸润,有散在的炎细胞。最后,软骨表面粗糙,滑膜细胞增生,有浆细胞浸润,少量纤维组织增生。80μg/ml亚博体育app官方下载地址对骨骼肌影响较大,部分细胞有玻璃样变,并有纤维组织增生,较50μg/ml亚博体育app官方下载地址对滑膜和软骨影响较大,滑软骨细胞稍肿胀,滑膜细胞肿胀较明显,随后软骨细胞增生,并部分脱落,最后软骨表面粗糙,软骨细胞增生,滑膜组织内有纤维增生,浆细胞浸润。 分析表明,浓度为10μg/ml的亚博体育app官方下载地址对骨骼肌没有明显损害作用;浓度为30-80μg/ml的亚博体育app官方下载地址肌肉注射后会产生损伤;50μg/ml以上时,对软骨、滑膜细胞产生损伤, 80μg/ml浓度的医用亚博体育app官方下载地址出现组织结构破坏。因此,30μg/ml以下的亚博体育app官方下载地址关节内注射是安全的。           
本实验初步观察了不同浓度医用亚博体育app官方下载地址对大鼠骨骼肌、滑膜及软骨的影响。如果要进行更为全面的观察,尚需研究骨性关节炎生化指标的变化及远期临床疗效的评价,同时还需更加深入的进行作用机理方面的研究。
 
参考文献
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